色譜法（chromatography）又稱色譜分析、色譜分析法、層析法，是一種分離和分析方法，在分析化學(xué)、有機(jī)化學(xué)、生物化學(xué)等領(lǐng)域有著非常廣泛的應(yīng)用。常見(jiàn)的色譜法主要有：柱色譜法、薄層色譜法、液相色譜法、氣相色譜法、超臨界流體色譜法。

1、柱色譜法

原始的色譜方法，該方法將固定相注入下端塞有棉花或?yàn)V紙的玻璃管中，將被樣品飽和的固定相粉末攤鋪在玻璃管頂端，以流動(dòng)相洗脫。

常見(jiàn)的洗脫方式有兩種：一種是自上而下依靠溶劑本身的重力洗脫，另一種：自下而上依靠毛細(xì)作用洗脫。

收集分離后的純凈組分也有兩種不同的方法：一種方法是在柱尾直接接受流出的溶液，另一種方法是烘干固定相后用機(jī)械方法分開(kāi)各個(gè)色帶，以合適的溶劑浸泡固定相提取組分分子。柱色譜法被廣泛應(yīng)用于混合物的分離，包括：對(duì)有機(jī)合成產(chǎn)物、天然提取物以及生物大分子的分離。

2、薄層色譜法

應(yīng)用非常廣泛的色譜方法，這種色譜方法將固定相涂布在金屬或玻璃薄板上形成薄層，用毛細(xì)管、鋼筆或者其他工具將樣品點(diǎn)于薄板一端，之后將點(diǎn)樣端浸入流動(dòng)相中，依靠毛細(xì)作用令流動(dòng)相溶劑沿薄板上行展開(kāi)樣品。薄層色譜法成本低廉、操作簡(jiǎn)單，被用于對(duì)樣品的粗測(cè)、對(duì)有機(jī)合成反應(yīng)進(jìn)程的檢測(cè)等用途。

3、液相色譜法（HPLC）

目前，應(yīng)用多的色譜分析方法，液相色譜系統(tǒng)由流動(dòng)相儲(chǔ)液瓶、輸液泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測(cè)器和記錄器組成，其整體組成類似于氣相色譜，但是，針對(duì)其流動(dòng)相為液體的特點(diǎn)作出很多調(diào)整。HPLC輸液泵要求輸液量穩(wěn)定平衡；進(jìn)樣系統(tǒng)要求進(jìn)樣便利、切換嚴(yán)密；由于液體流動(dòng)相黏度遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于氣體，為了減低柱壓，液相色譜的色譜柱一般比較粗，長(zhǎng)度也遠(yuǎn)小于氣相色譜柱。HPLC應(yīng)用非常廣泛，幾乎遍及定量定性分析的各個(gè)領(lǐng)域。

4、氣相色譜法

氣相色譜法是將氦或氬等氣體作為載氣(稱移動(dòng)相)，將混合物樣品注入裝有填充劑(稱固定相)的色譜柱里，進(jìn)行分離的一種方法。分離后的各組分經(jīng)檢測(cè)器變?yōu)殡娦盘?hào)并用記錄儀記錄下來(lái)。氣相色譜法近20年發(fā)展很快，種類很多，通常有五部分組成：(1)氣源包括載氣、燃燒器、助燃?xì)?、氣體的凈化和流量控制系統(tǒng)；(2)進(jìn)樣系統(tǒng)包括氣化室和注射器等；(3)色譜柱是氣相色譜的心臟，它又分為裝有填充劑的填充柱和非常細(xì)的毛細(xì)管柱；(4)檢測(cè)器；(5)記錄儀或電子計(jì)算系統(tǒng)。

5、超臨界流體色譜法

超臨界流體色譜(supercritical fluid chromatography；SFC)以超臨界流體做流動(dòng)相是依靠流動(dòng)相的溶劑化能力來(lái)進(jìn)行分離、分析的色譜過(guò)程，是20世紀(jì)80年代發(fā)展和完善起來(lái)的一種新技術(shù)。

超臨界流體色譜兼有氣相色譜和液相色譜的特點(diǎn)。它既可分析氣相色譜不適應(yīng)的高沸點(diǎn)、低揮發(fā)性樣品，又比液相色譜有更快的分析速度和條件。操作溫度主要決定于所選用的流體，常用的有二氧化碳及氧化亞氮。超臨界流體容易控制和調(diào)節(jié)，在進(jìn)入檢測(cè)器前可以轉(zhuǎn)化為氣體、液體或保持其超臨界流體狀態(tài)，因此可與現(xiàn)有任何液相或氣相的檢測(cè)器相連接，能與多種類型檢測(cè)器相匹配，擴(kuò)大了它的應(yīng)用范圍和分類能力，在定性、定量方面有較大的選擇范圍。還可以用多種梯度技術(shù)來(lái)優(yōu)化色譜條件。并且比液相色譜法易達(dá)到更高的柱效率。