色譜定量依據(jù)

以氣相色譜為例，氣相色譜是用峰面積或者峰高來定量的。依據(jù)如下：

1、重要的第一條，就是檢測器的線性響應(yīng)關(guān)系。

在所有的色譜檢測器中，除了FPD之外，所有的檢測器都遵從線性響應(yīng)，也就是說m=KS。這里m指單位時間內(nèi)到達檢測器的待測物質(zhì)的量（包括質(zhì)量或物質(zhì)的量），K表示線性響應(yīng)系數(shù)，S表示檢測器響應(yīng)信號的值。也就是說，檢測器響應(yīng)信號的大小與單位時間到達檢測器的被測物質(zhì)的總量成正比。當然我們也知道，這個關(guān)系是有范圍的，量太大或者太小，都會脫離線性。

2、其次就是第二條，塔板理論。

塔板理論充分闡述了峰高與進樣量之間的關(guān)系，或者說他們之間是成正比的。這個可以參考對塔板理論的說明。

色譜峰經(jīng)常拖尾，所以用峰面積定量就可以了，峰面積絕大多數(shù)情形下都具有很好的代表性。但是在檢測器超載，或模數(shù)轉(zhuǎn)換器超載，或峰面積積分不準，或進樣代表性不足，以及一些其他特殊情形下，用峰面積也不能得到正確結(jié)果。但無論如何，用峰面積定量已經(jīng)是我們可實行的最準確方法了。

其他操作條件，如流速、柱溫等變化對定量結(jié)果的影響也很小，GC廣泛應(yīng)用于HPLC。

2、外標法（標準曲線法、直接比較法）

首先用欲測組分的標準樣品繪制標準工作曲線。

具體作法是：用標準樣品配制成不同濃度的標準系列，在與欲測組分相同的色譜條件下，等體積準確量進樣，測量各峰的峰面積或峰高，用峰面積或峰高對樣品濃度繪制標準工作曲線，此標準工作曲線應(yīng)是通過原點的直線。若標準工作曲線不通過原點，說明測定方法存在系統(tǒng)誤差。標準工作曲線的斜率即為絕對校正因子。

當欲測組分含量變化不大，并已知這一組分的大概含量時，也可以不必繪制標準工作曲線，而用單點校正法，即直接比較法定量。單點校正法實際上是利用原點作為標準工作曲線上的另一個點。因此，當方法存在系統(tǒng)誤差時（即標準工作曲線不通過原點），單點校正法的誤差較大。因此規(guī)定，y=ax+b，b的絕對值應(yīng)不大于100%響應(yīng)值是y的2%。

標準曲線法的優(yōu)點：繪制好標準工作曲線后測定工作就很簡單了，計算時可直接從標準工作曲線上讀出含量，這對大量樣品分析十分合適。特別是標準工作曲線繪制后可以使用一段時間，在此段時間內(nèi)可經(jīng)常用一個標準樣品對標準工作曲線進行單點校正，以確定該標準工作曲線是否還可使用。

標準曲線法的缺點：每次樣品分析的色譜條件（檢測器的響應(yīng)性能，柱溫度，流動相流速及組成，進樣量，柱效等）很難完全相同，因此容易出現(xiàn)較大誤差。另外，標準工作曲線繪制時，一般使用欲測組分的標準樣品（或已知準確含量的樣品），因此對樣品前處理過程中欲測組分的變化無法進行補償。

3、內(nèi)標法

選擇適宜的物質(zhì)作為欲測組分的參比物，定量加到樣品中去，依據(jù)欲測組分和參比物在檢測器上的響應(yīng)值（峰面積或峰高）之比和參比物加入的量進行定量分析的方法稱為內(nèi)標法。

內(nèi)標法的關(guān)鍵是選擇合適的內(nèi)標物。內(nèi)標物應(yīng)是原樣品中不存在的純物質(zhì)，該物質(zhì)的性質(zhì)應(yīng)盡可能與欲測組分相近，不與被測樣品起化學(xué)反應(yīng)，同時要能完全溶于被測樣品中。內(nèi)標物的峰應(yīng)盡可能接近欲測組分的峰，或位于幾個欲測組分的峰中間，但必須與樣品中的所有峰不重疊，即完全分開。

內(nèi)標法的優(yōu)點：進樣量的變化，色譜條件的微小變化對內(nèi)標法定量結(jié)果的影響不大，特別是在樣品前處理（如濃縮、萃取，衍生化等）前加入內(nèi)標物，然后再進行前處理時，可部分補償欲測組分在樣品前處理時的損失。若要獲得很高精度的結(jié)果時，可以加入數(shù)種內(nèi)標物，以提高定量分析的精度。

內(nèi)標法的缺點：選擇合適的內(nèi)標物比較困難，內(nèi)標物的稱量要準確，操作較麻煩。使用內(nèi)標法定量時要測量欲測組分和內(nèi)標物的兩個峰的峰面積（或峰高），根據(jù)誤差疊加原理，內(nèi)標法定量的誤差中，由于峰面積測量引起的誤差是由于進樣量的變化和色譜條件變化引起的誤差，內(nèi)標法比標準曲線法要小很多，所以總的來說，內(nèi)標法定量比標準曲線法定量的準確度和精密度都要好。

4、標準加入法

標準加入法實質(zhì)上是一種特殊的內(nèi)標法，是在選擇不到合適的內(nèi)標物時，以欲測組分的純物質(zhì)為內(nèi)標物，加入到待測樣品中，然后在相同的色譜條件下，測定加入欲測組分純物質(zhì)前后欲測組分的峰面積（或峰高），從而計算欲測組分在樣品中的含量的方法。

標準加入法的優(yōu)點：不需要另外的標準物質(zhì)作內(nèi)標物，只需欲測組分的純物質(zhì)，進樣量不必十分準確，操作簡單。若在樣品的前處理之前就加入已知準確量的欲測組分，則可以完全補償欲測組分在前處理過程中的損失，是色譜分析中較常用的定量分析方法。

標準加入法的缺點：要求加入欲測組分前后兩次色譜測定的色譜條件完全相同，以保證兩次測定時的校正因子完全相等，否則將引起分析測定的誤差。

簡單來說，當能精確進樣的時候，也就是能夠保證每一次進樣總的進樣體積都一樣的時候，總是傾向于選擇外標法，當然有些時候也選擇歸一化法。當無法精確進樣的時候，我們總是傾向于歸一化法。當無法精確進樣，又無法使用歸一化法的時候，總是傾向于選擇內(nèi)標法。當用內(nèi)標法也無法解決的時候，會選用內(nèi)加法或者標準加入法這個復(fù)雜的方式來定量。